细胞培养室管理规定（细胞实验室操作规范）

细胞培养室管理规定

1.本细胞培养室是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度，按培养室管理规定操作。

2.实验人员进入该实验室进行实验工作时，必须更换、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有关细胞培养的操作均在超净台上进行，严格按无菌程序操作。

3.严禁将与实验无关的易燃、易爆及其他有毒有害物品带入实验室；在本实验室内不得进行微生物等其它易污染物的培养。

4.实验人员在进行实验前必须熟悉实验内容、操作步骤及各类仪器的性能和操作方法，严格执行操作规程，并做好必要的安全防护。

5.培养实验所用试剂专人专用，以防止交叉污染。

6.实验室中的昂贵设备，未经许可，不得擅自开关。精密仪器必须经过专门培训方能上机操作，并严格遵守操作规程。

7.使用仪器前认真阅读“操作规程”，并严格按“操作规程”进行操作，实验人员必须按规定的主要仪器参数进行操作，未经许可，不得随意更改有关仪器设备的技术参数，仪器设备出现故障或发生事故，应立即报告。

8.进行无菌操作前，应用75%酒精消毒桌面，打开无菌室、超净工作台及缓冲间的紫外灯，以紫外线照射至少30分钟，然后打开无菌室和超净工作台的空气过滤器，净化20分钟后再进入。

9.每次实验结束后，应及时清理桌面、台面、地面，整理好用过的实验器材，用1‰的新洁尔灭溶液或75％酒精擦台面。观察培养箱中CO2的浓度、温度、供气压力等参数，待正常后方可离开。实验区用紫外线照射30分钟，并做好记录。将废弃物品带出操作间。出门前注意关闭酒精灯、照明灯，超净台。

10.进入细胞室的实验人员必须遵守清洁卫生值日安排。严禁随意反复进出培养室。每周做全面清洁消毒一次，超净台上滤网需每月清洗一次。在确认无菌室无人后方可开紫外灯杀菌。

11.爱护实验室公共财物；节约使用常规实验耗材、节约用电；注意防火防盗，杜绝一切可能导致火灾的行为。

12.实验室的安全门是用来搬动大型仪器和处置紧急情况的通道，非紧急情况不得随意开启安全门；如发生火警、气体泄漏、漏电等紧急情况，室内人员应迅速通过安全门离开实验室。

13.严禁在实验室内吸烟和进餐；实验过程中严禁喧哗、闲聊。

14.本制度自公布之日起生效，解释权归实验室。

实验室操作规范

1.规定净化系统使运转时间要求每次实验前应开启净化系统使运转至少1小时以上，同时开启净化台和紫外灯。

2.物品进入洁净室（无菌室）基本要求：凡进入洁净室（无菌室）的物品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1小时以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。

3.人员进入洁净室（无菌室）要求：实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰;不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30 S风淋后进入无菌室。

4.温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。

5.沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。

6.消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5~20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1∶50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（配方：对羟基苯甲酸甲酯21.5 g；对羟基苯甲酸丙酯8.6 g，75%乙醇10 ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1~2小时，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30 分钟。

7.其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1 h以上。